Salmonellaاختبار السالمونيلا - (اختبار ويدال) ( Test (Widal Test

نبذة عن بكتيريا السالمونيلا Summary of Salmonella
عصوية short bacilli، سالبة لصبغة جرام Gram negative bacilli،متحرك motile،لا تكون كبسولة non-capsulated.
لبكتيريا السالمونيلا أكثر من 1400 نوع مصلي serotypes بعضها يسبب أمراضاً للإنسان.
لبكتيريا السالمونيلا عدة أجناس أهمها طبياً S. Typhi و S. Paratyphi والتي تسبب الحمى معوية enteric fever
وأنواع S. Typhimurium و S. Enteretidis التي تسبب تسمم غذائي food poisoning والتهاب القولون enterocolitis
ونوع S. Choleraesuis الذي يسبب التسمم للدم septicaemia

الخصائص المصلية Serological characters
تحتوي بكتيريا السالمونيلا على ثلاث أنواع من الأنتجين antigens وهما جسم البكتيريا somatic الذي يرمز له بـ (O antigen) وعلى السوط flagellar ويرمز له بـ (H antigen) والكبسولة (المحفظة) capsulate ويرمز لها بـ (K antigen )

تقاوم هذه البكتيريا الممرضة المناعة الطبيعية بجسم الإنسان وذلك بمنعها للبلعمة والإلتهام وكذلك بإفراز سم داخلي Endotoxin وقد تفرز سم خارجي Exotoxine

مبدأ الاختبار المصلي
الاختبار يجرى بطريقة اللاتكس Latex Method وهي طريقة حساسة إلى حد كبير إذا تم إجراء الاختبار تحت الظروف المناسبة ويتم التراص بالطريقة المباشرةDirect Agglutination
ومبدأ الاختبار هو إضافة الأنتيجينات Reagent بعد معاملتها صناعياً إلى الأجسام المضادة في مصل المريض سيُحدث تراص Agglutination واضح بالعين المجردة.
طريقة التراص في الأنابيب أفضل من طريقة التراص على شريحة اللاتكس لكن سهولة وسرعة أجراء اللاتكس (الشريحة) وأيضاً قلة التكلفة جعلته هو السائد عند الكثير من البلدان التي يستوطن فيها هذا المرض.

• لابد من ملاحظة البروزون Prozone في النتائج السلبية من الاختبار حيث أنها من الممكن أن تعطي نتائج سلبية كاذبةFalse Negative وذلك بسبب وجود نسبة عالية من الأجسام المضادة في المصل ما يحُدث التنافس على الارتباط مع الأنتيجينات Reagent وبالتالي لا يحدث التراص الواضح ، ولتجنب ذلك عمل الاختبار بتخفيف العينة Dilution of Sample حتى تقل كمية الأجسام المضادة في المصل وبالتالي يعطي نتائج جيدة وواضحة.

اختبارويدال Widal Test
في هذا الاختبار يتم البحث عن الأجسام المضادة الخاصة بالسالمونيلا من نوع IgG و IgM في مصل Serum المريض، ويتميز هذا الاختبار بسهولة عمله وحساسيته إذا تم عمل الاختبار بطريقة التخفيف Dilution، واختبار فيدال هو للأنواع S. Typhi و S. Paratyphi فقط أم بقية الأنواع فمن الأفضل الكشف عنها بطريقة الزراعة في معمل المايكروبيولوجي ، وكما ذكرت سابقاً فأن الاختبار يبحث عن الأجسام المضادة المتكونة من دخول الأنتيجينات لجسم المصاب وأهم هذه الأنتيجينات O antigen (جسم البكتيريا somatic) و H antigen (سوط البكتيريا flagellar).
لهذه الأنتيجينات عدة أنواع مهماً طبياً لذلك لابد من الكشف عنها باختبار فيدال وهي:
لـ O antigen أربعة أنواع هي OA و OB و OC و OD
لـ H antigen أربعة أنواع هي HA و HB و HC وHD

طريقة عمل اختبار WidalTest procedure1.
تحضر جميع المحاليل Reagents وعينات المرضى (مصل Serum) على درجة حرارة الغرفة.
2. يوضع 20 ميكروليتر من Positive control في الحجرة الأولى Well على شريحة اللاتكس 0 ميكروليتر من Negative control في الحجرة الثانية وذلك من أجل المقارنة بعد خروج نتائج الاختبار مع الكنترول والتأكد من أن المحاليل Reagents سليمة وصالحة للاستخدام.
3. يستخدم 8 حجرات لكل عينة (يوجد 8 أنواع من الأنتجين) وذلك بوضع 20 ميكروليتر من المصل Serum في كل حجرة Well.
4. تمزج محاليل اللاتكس المحتوية على الأنتيجينات لكل أنواع السالمونيلا الثمانية بالتقليب ثم تؤخذ 40 ميكروليتر(قطرة واحدة Drop) منه إلى كل حجرة المحتوية على مصل المريض.
5. تمزج Mix بشكل دائري باستخدام الأعواد المناسبة.
6. توضع شريحة اللاتكس على الهزاز Shaker لمدة 1-3 دقائق يظهر التراص تحت ضوء مناسب ولا تؤخذ نتيجة بعد هذا الوقت لأن بدء جفاف العينة قد يؤدي إلى ظهور ايجابية كاذبة Positive False.

• (+) : حدوث تراص Agglutination (Ab-Ag Reaction)
• (-) : عدم حدوث تراص Non Agglutination (Ab-Ag Non Reaction)
• في حالة حدوث تراص Agglutination لابد من عمل التخفيف للعينة Dilution of Sample :
• يفضل عمل التخفيف في أنابيب Tubes ويوضع في كل أنبوب 100 ميكروليتر من الـ Normal Saline ويوضع في الأنبوب الأول 100 ميكروليتر من عينة المصل Serum وتمزج وينقل إلى الأنبوب الثاني 100 ميكروليتر وهكذا إلى آخر أنبوب في أنابيب التخفيف بعد ذلك ينقل من كل أنبوب 100 ميكروليتر إلى الحجرات في شريحة اللاتكس ويضاف المحلول Reagents على كل الحجرات Wells .
• يتم تسجيل آخر تخفيف ظهر فيه التفاعل إيجابي (+) كنتيجة نهائية للاختبار (قد تختلف مقدار وطريقة التخفيف من شركة مصنعة لأخرى)[b]